Beaver家族明星产品——蛋白纯化磁珠，一经推出其秉承快速、高效、低成本的优势，获得广大小伙伴的追捧和欢迎。因此小伙伴们也提出了许多问日，小编就几点常见的问题为大家分享。
１.IDA-镍和IDA-钴的区别，应怎么选择？
答：IDA-镍的蛋白载量高，40mg/mL gel，获得蛋白纯度稍低90%；IDA-钴的蛋白载量稍低，25mg/mL gel获得蛋白质纯度为95%。一般客户建议购买IDA-镍磁珠，即可达到目的。
2.蛋白纯化时得到的蛋白量少，什么原因？
答：（1）磁珠用量不足；
（2）蛋白浓度低；
（3）蛋白与磁珠亲和力较低；
（4）磁珠重复使用次数太多，此时应将磁珠进行再生处理。
3. 为什么使用IDA-Ni2+纯化蛋白时，洗脱产物杂带多？
答：（1）菌体破碎条件太剧烈导致蛋白断裂；
（2）蛋白被部分水解：添加合适的蛋白酶抑制剂，并尽可能在低温下操作；
（3）杂蛋白吸附。由于组氨酸，色氨酸，半胱氨酸等是蛋白质中很常见基团，而蛋白折叠可能导致几个这样的氨基酸残基临近，这样也会使它们和磁珠的作用力增加。可以用不同浓度的咪唑进行梯度洗脱，在样品及平衡缓冲液中添加0.5%吐温或TritonX-100，或5~50%的甘油，可以避免因为疏水相互作用导致非特异吸附，或使用钴离子螯合磁珠（BeaverbeadsTMIDA-Cobalt）。
此外，要获得纯度较高的蛋白，需要对裂解、结合缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液的组分、pH、咪唑浓度等进行优化。若还是不能获得高纯度的蛋白，则需要考虑使用多步纯化，结合使用离子交换、凝聚过滤等纯化方法。
4. 目标蛋白已经偶联到磁珠上，但是很难洗脱下来？
答：（1）洗脱调节太温和。提高洗脱液咪唑浓度至500mM，还不能洗脱时，可以尝试降低洗脱液pH至4.0，但低pH会也导致金属离子脱落；
（2） 蛋白吸附在磁珠上无法洗脱。对于非特异性疏水吸附的蛋白，可以增加NaCl浓度至1M，或添加0.1%~2%的Triton X-100。对于聚集沉淀在磁珠上的，可以在洗脱缓冲液中加入6M盐酸胍进行变性洗脱。
5. 磁珠再生后，为什么蛋白纯化效果会变差？
答：①遇到此情况后，可在再生过程后进行碱处理，可以改善再生磁珠的蛋白纯化效果；
②重新挂金属离子后需要将金属离子清洗干净，必要时可增加洗涤步骤。（残留的金属离子优先跟蛋白结合，影响蛋白与磁珠的结合。）
6. IDA磁珠产品中，缓冲液中咪唑添加的意义？
答：结合缓冲液中低浓度的咪唑是为了减少杂蛋白的非特异性吸附；洗涤缓冲液中低浓度咪唑是为了洗脱杂蛋白；洗脱液中高浓度咪唑是为了洗脱目的蛋白。