蛋白电泳
SDS-PAGE及Western blot
蛋白电泳 SDS-PAGE原理
SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。实验使用过程中，还加入DTT或者巯基乙醇，以打开蛋白间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS—PAGE最常采用垂直板不连续系统（分离胶与浓缩胶）。
一、样品制备
| 产品货号 | 产品名称 |
|---|---|
| R0010 | 高效RIPA_ |
| R0020 | 普通RIPA |
| R0030 | 非变性组织细胞裂解液 |
| A8260 | Aprotinin 蛋白酶抑制剂（抑肽酶） |
| P8100 | Pepstatin A 胃蛋白酶抑制剂 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物 |
| T8031 | Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制剂 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物 |
| 539133 | Protease Inhibitor Cocktail Set VI |
| 539134 | Protease Inhibitor Cocktail Set III |
| PC0030 | Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 |
| PC0010 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒> |
| PC0020 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
注：本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合于Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法。
| 产品货号 | 产品名称 | 说明 |
|---|---|---|
| R0010 | 高效RIPA组织/细胞裂解液 | 在普通RIPA的基础上改进而来,含蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂(配有一支PMSF) |
| R0020 | RIPA组织/细胞裂解液 | RIPA经典配方，适于绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫实验。组成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存： 4 ºC避光 |
| R0030 | 非变性组织/细胞裂解液 | 非变性条件下裂解的蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。 |
| R0050 | 核蛋白提取试剂盒 | |
| BC3640 | 全蛋白提取试剂盒 | |
| BC3720 | 植物蛋白提取试剂盒 | |
| BC3710 | 全蛋白提取试剂盒（强） | |
| BC3711 | 全蛋白提取试剂盒（中） | |
| BC3730 | 磷酸化蛋白提取试剂盒 | |
| BC3740 | 胞浆蛋白提取试剂盒 |
蛋白含量测定是以标准蛋白作为对照，根据蛋白浓度不同，吸光值不同而达到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值（紫外光谱吸收法）来定量，但更多的是用染料对蛋白进行染色，利用染料与蛋白结合显出与原染料及蛋白不同的吸光值来定量的。后一种方法应用更普遍。蛋白定量方法的选择，应该考虑到蛋白结构（标准品选择）、蛋白溶液内干扰物等因素的影响。
| 产品货号 | 产品名称 | 组成 | 说明 | |||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| PC0010 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 |
|
干扰物质少， Tris、糖、甘油、巯基乙醇、氨、EDTA等均不干扰测定。 | |||||||||||||||
| PC0020 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
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BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 | |||||||||||||||
| PC0030 | Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 |
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Lowry法测定较为不受脂类物质干扰，适于脂类含量较高的样品测定。也能耐受相当浓度的去垢剂如SDS。 |
SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，实验室可根据自己的情况和习惯来选择试剂。如选择1、2、3、4、5、6、7、8、9全部试剂可自己配制。也可以选择配制好的试剂。如10、11、12、13/14、16、9、20。还可选择10、13/14、16、9、17、18、19、20。
| 系号 | 产品货号 | 产品名称 | 系号 | 产品货号 | 产品名称 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | T8060 | TRIS 三羟甲基氨基甲烷 | 11 | S1051 | 4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=8.8） |
| 2 | G8200 | Glycine 甘氨酸 | 12 | S1052 | 4XSDS-PAGE浓缩胶缓冲液（PH=6.8） |
| 3 | S8010 | SDS 十二烷基硫酸钠 | 13 | P1016 | 4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇) |
| 4 | A8080 | Acrylamide 丙烯酰胺 | 14 | P1015 | 4×蛋白上样缓冲液(含DTT) |
| 5 | M8200 | N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺 | 15 | D1070 | 1M DTT |
| 6 | A8090 | Ammonium Persulfate 过硫酸胺 | 16 | A1030 | 10%过硫酸氨 |
| 7 | D8220 | DTT 二硫苏糖醇 | 17 | T1020 | 1M Tris-HCL (PH6.8) |
| 8 | M8210 | β-Mercaptoethanol β-巯基乙醇 | 18 | T1010 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) |
| 9 | T8090 | TEMED 四甲基乙二胺 | 19 | S1010 | 10%SDS |
| 10 | A1010 | 30%丙烯酰胺（29:1） | 20 | T1070 | 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 |
凝胶配制表（一）
凝胶配制表（二）
本公司的丙烯酰胺是29：1的，如需要定制其他规格的可以联系我们。 为了客户实验方便，我们生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（P1200）和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒（P1320），后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分离。包含了制胶的全部试剂，方便客户操作。 如果您想节省时间，也可以使用我们的预制胶，无需配胶，直接跑电泳即可。
| 分离胶12% | 分离胶10% | 分离胶8% | 浓缩胶（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 总体积 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 4X分离胶缓冲液（PH8.8） | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 4X浓缩胶缓冲液（PH6.8） | 0 | 0 | 0 | 1.25ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| ddH2O | 3.4ml | 4.1ml | 4.7ml | 3.2ml |
| 10%过硫酸铵 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
| 分离胶12% | 分离胶10% | 分离胶8% | 浓缩胶（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 总体积 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| 1M Tris-HCL (PH6.8) | 0 | 0 | 0 | 0.625ml |
| 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 10%SDS | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |
| ddH2O | 3.3ml | 4.0ml | 4.6ml | 3.75ml |
| 10%过硫酸铵 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
本公司的上样缓冲液既有用于非变性的（P1017、p1027）又有变性的（P1015、P1016、P1017、P1018），有不同的稀释倍数，可以满足客户的多种实验需求。 电泳缓冲液既有用于普通的tris-甘氨酸缓冲系统的产品（T1070），又有用于Bis-tris这种系统的MOPS缓冲液（T1510） 蛋白marker有多种，非预染marker、预染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且还有GE原装的变性非变性marker，广泛的分子量和用途供您选择。
| 产品货号 | 产品名称 | 产品货号 | 产品名称 |
|---|---|---|---|
| P1015 | 4×蛋白上样缓冲液（含DTT） | P1016 | 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇） |
| P1018 | 2×蛋白上样缓冲液（含DTT） | P1019 | 2×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇） |
| P1017 | 4×非变性蛋白上样缓冲液 | p1027 | 2×非变性蛋白上样缓冲液 |
| T1070 | 5×Tris甘氨酸电泳缓冲液 | T1510 | Tris-Mops缓冲液(10×) |
| PR1300-15 | 次高分子量蛋白质标准 15T | PR1400-20 | 低分子量蛋白质标准(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1500-10 | 次高分子量蛋白质标准 10T | PR1600-20 | 预染低分子量蛋白质(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1700-10 | 预染次高分子量蛋白质标准 10T | PR1800-10 | Western Blot Marker 10T(50ul） |
| PR1900 | 预染超低分子量蛋白marker（3.3-31KD) 20T | PR1910 | 彩虹180广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
| PR1920 | 彩虹245广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) | PR1930 | 彩虹245plus广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
跑胶后的染色可以用银染或者考染的方法，如果蛋白量少，推荐使用灵敏度高一些的银染试剂盒（G7210），否则常规染色可以使用（P1305）和（P1300），其中P1300的优点是染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带，节省了染色脱色的时间。
| 产品货号 | 产品名称 |
|---|---|
| C8430 | 考马斯亮蓝R 250染色液 |
| P1300 | 考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 |
| P1305 | 考马斯亮蓝染色套装 |
| G7210 | PAGE凝胶银染试剂盒 |
| PG00810-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 4～15% | 10片/盒 |
| PG42010-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-S | Precast-Gel预制胶 | 变性预制胶 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
| PG00810-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 4-15% | 10片/盒 |
| PG42010-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-N | Precast-Gel预制胶 | 非变性预制胶 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
Millipore和PALL公司的尼龙膜和pvdf膜，具有0.22um和0.45um两种规格。 转膜后还可以用P0012（10×丽春红）检测转膜效果，尤其是针对NC膜效果更佳。 为了节省成本和时间，您可以选择本公司的SW3020（Western Blot膜再生液）对用过的膜进行清洗，随后，可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来，实际操作中，膜类型、抗体类型、浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。 注意：适用于 ECL和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测，例如DAB，NBT/BCIP。
实验操作过程中您可以针对不同的抗体选择上面合适的稀释液。
| 产品货号 | 产品名称 |
|---|---|
| P0012 | 10×丽春红 |
| SW3010 | 膜封闭液 |
| A1800 | 抗体稀释液 |
| A1810 | 一抗稀释液 |
| A1820 | HRP标记抗体稀释液 |
| A1830 | AP标记抗体稀释液 |
| A1840 | 荧光抗体稀释液 |
| T1085 | 1×TBST |