pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒
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| 本试剂盒所包含的原核表达载体(pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO载体基础上改造而成(**)，该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌，在低温下(15度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢，使得蛋白合成速度减慢，从而最大限度的提高了蛋白正确折叠的几率，提高了蛋白可溶性表达，增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量，而且能进一步提高蛋白的可溶表达几率。另外，TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。 升级后的pCold-SUMO-10His载体，其SUMO蛋白标签含有10个组氨酸标签（10His tag），使其结合Ni-NTA的能力更强。与较早版本的pCold-SUMO表达系统相比，pCold-SUMO-10His表达系统在保留了原有系统的蛋白可溶性生产能力、高特异性剪切能力的情况下，显著提高了与Ni-NTA的结合能力。通过与Ni-NTA结合能力的提高，在以下三个方面改善了生产重组蛋白的性能：（1）提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力，从而提高纯化产量；（2）在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗，去杂蛋白的能力明显提升，从而获得更高纯度的重组蛋白；（3）在重组蛋白酶切去除SUMO标签后，利用Ni-NTA去除SUMO标签更为彻底，获得纯度更高的无标签目标蛋白。 |
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组分 |
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主要特征 |
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应用 |
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| 包涵体蛋白的最佳解决方法，提高蛋白的可溶性优化表达。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
实例 |
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Fig1 . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未诱导 2. pET15b系统表达全菌体蛋白 3.pET15b系统表达上清液(可溶蛋白部分) 4.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)全菌体蛋白 5.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分) 6.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone全菌体蛋白 7.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分) 8.使用Ni-NTA Resin纯化SUMO融合蛋白 9.切除SUMO tag后的目的蛋白 |
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| 泳道2和3表明使用pET系统表达几乎无可溶性蛋白表达，皆为包涵体；泳道4和5表明使用pCold-SUMO系统于BL21(DE3)菌中，可溶性蛋白表达约占40%；泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可进一步提高蛋白的可溶性表达。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
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Fig2. 分别用2 μl和5 μl的SUMO蛋白酶（C0801）对100 μg pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 表达所得对照蛋白进行酶切1h或3h，如图所示。M：Protein Marker，泳道1：纯化后的含SUMO标签的对照蛋白； 泳道2：2μl SUMO Protease 酶切1h产物；泳道3：5μl SUMO Protease 酶切1h产物； 泳道4：2μl SUMO Protease 酶切3h产物；泳道5：5μl SUMO Protease 酶切3h产物。 | |||||||||||||||||||||||||||||