自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求： 

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作程序：

1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗p47phox抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗p47phox抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

操作程序总结：

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%

检测范围：

检测范围：3ng/L-140ng/L

保存条件及有效期：

保存：2-8℃。

有效期：6个月(2-8℃)。

大鼠p47phox酶联免疫

       检测试剂盒使用说明书   AE96503Ra

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠p47phox，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

用  途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中p47phox测定。

工作原理：本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠p47phox水平。向预先包被了大鼠p47phox单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠p47phox，温育；温育后，加入生物素标记的抗p47phox抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠p47phox的浓度呈正相关。

试剂盒组成：