多肽合成 抗原多肽交联中常见问题-技术前沿-资讯-生物在线

多肽合成 抗原多肽交联中常见问题

作者:北京中科亚光生物科技有限公司 2016-10-27T09:54 (访问量:2181)

1、多肽与载体蛋白交联

对在动物体内产生免疫反应而言,大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等交联之后,不仅能增加抗原的大小,也能增强免疫性。我们可以提供与KLHBSA两种蛋白的交联。大多数客户选择与KLH交联,因为KLH的免疫性更好,而且BSA在很多实验中作为Blocking试剂,由于动物体内既会产生对多肽的抗体也会产生对载体蛋白的抗体,这样会出现假阳性。

2、抗体的使用

由于抗体与很多生物分子,以蛋白和多肽等尤为显著,有很强的结合能力,抗体在生物医学研究中占据独特的重要地位,在对蛋白的特性、含量的测定、分布情况的分析和蛋白的确证等方面都需要用到抗体。例如:诊断试剂盒如早孕试剂盒等,蛋白microalloyimmunohistochemistry 和普通的ELISA实验等。由于抗体有对特定分子很强的结合能力的特点,用抗体进行体内治疗成了许多努力的方向。成功的范例包括GenetechHerceptin,用于治疗一类特殊的乳腺癌和IDEC药业公司的Ritaxan,用于特定类型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-细胞。

3、抗原和识别区域:

大多数情况下,antigenimmunogen两个字是可以互换使用的,它们的差别是很小的。他们是分别指一个分子与免疫系统之间的两种类型的相互作用。一个immunogen是指能使一个生物组织的免疫系统产生免疫反应的分子,而一个antigen是指能与这种免疫反应的产物结合的分子,所以immunogen一定是antigen,但antigen不一定是immunogen,我们这里通用antigen,特指能与免疫反应的产物抗体结合的分子。
识别区域(epitopes)是指一个抗原分子中一个与抗体直接结合的一段特定的序列,对于任何抗原(抗原蛋白),很有可能有多个抗体识别区域,对生产抗体而言,易于抗体识别的部位的识别区域最为理想。

4、进行KLH交联的化学方法

我们用MBS活化KLH,这样能将载体蛋白(KLH)上面的自由-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来,这种方法直接,特异性高,而且稳定,通常选择对免疫不重要的一端进行交联。
EDC
活化载体上的-COOH,将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的方法。但我们只建议在多肽序列中有多个Cys时采用该方法。如果肽链中含有多个-COOH-NH2基因,不建议使用该方法,因为会造成多重点交联的情况,使多肽结构受影响。常用载体蛋白除KLH外,还有BSAOvalbumin等,造成KLH的优势是它不干扰ELISAWesternBlot等实验。

5、对抗原多肽交联合适的肽链长度

通常建议10-15个残基进行交联。肽链越长,抗体识别的区域越多,但也就越多机会形成稳定的二级结构。就不再是天然的形式了。太短的肽通常是没有用的,除非有充足的理由,如与相关家族蛋白或其他蛋白有序列同源性等。

6、KLH交联多肽溶液呈乳状的原因

KLH是一个很大的并且聚合的蛋白。因为它的结构和大小,它在水中的溶解度是很有限的,因此是乳状,这并不影响它的免疫性,这种混浊的溶液可以直接免疫动物。

7、抗体的产量

抗体的产量取决于很多因素:识别区域的选择,多肽的合成,载体的交联,免疫的操作步骤和动物的生理系统等等,因此抗体的产量是不等的。5-25mg都属于正常范围。

 

转自网络

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