从圣湘上市看上游分子酶产业发展之细--RNasin

今年的新冠疫情，几乎打乱了大多数IVD企业的脚步。在疫情开始初期，IVD企业便一路乘风破浪，开足马力拼研发速度、拼注册速度、拼宣传速度、拼销售速度，都希望能够快速占领市场、跻身前列，实现“名利双收”。然而只有拥有优秀的生产、质控、监督管理体系的企业，才可以在疫情中快速通过认证并上市。其中圣湘生物一季度净利润增长32倍，于6月23日实现科创板首发过会，无疑是真正的赢家。而IVD领域上游分子酶原料企业，亦功不可没。

国内分子酶原料现状

随着国内体外诊断厂家的崛起，原料公司在近几年呈快速发展趋势。我国分子酶原料厂家以北京、上海、广州-深圳为中心分布，国内IVD原料竞争之激烈可见一斑。与此同时，随着IVD终端市场的竞争逐步加剧，IVD的战火也引至上游原料领域 。众所周知，早期95%以上的IVD核心酶原料市场几乎被德国罗氏、日本东洋纺、英国NEB等进口公司占据。究其原因还是核心原料被这些进口厂商所垄断，受制于人的现象非常明显。深究原因，上游IVD试剂原料的品质至关重要。

原料是产品的源头，源头不合格，就根本谈不上终端产品的质量。上游原料企业都应为自己的产品质量负责，从产品风险着手，建立质量体系和监督管理体系。同时企业应定期进行内审，认真核查质量体系是否存在缺陷，并针对每一缺陷项进行整改和跟进，具体措施做好记录和分析。质量体系应及时进行状态的更新，有效控制产品的质量，不断完善体系的科学性和有效性。建立原料生产与质控体系非一日之功，IVD终端企业首先应选择具有规模化生产能力的原料企业，精准把握原料控制。翊圣生物作为分子酶企业的创新领导者，在体系建设上严格把控，同时积极布局未来之路。这里我们以新冠核酸检测试剂盒中的关键辅料为例，细说翊圣高品质制造。

新冠核酸检测试剂盒明细

市面上已报证的新冠检测试剂盒中大多包含5个组成部分：核酸扩增反应液、酶混合液、引物探针、阳性对照和阴性对照。阴性和阳性对照主要是为了保证检测结果的准确性，而检测的灵敏度主要取决于酶混合液，即逆转录酶的效率和Taq酶的灵敏度。从新冠检测试剂盒的常规组分中可以看到上游原料部分主要包含热启动Taq酶、逆转录酶等核心酶、引物探针、对照用假病毒。然而核心酶组分中RNasin的作用也不可小觑，直接决定最终检测结果的成败。在常规RNA相关的实验中，RNasin几乎随处可见。

² 用于RNA提取实验中防止RNA降解

² cDNA合成、体外转录实验

² 一步法RT-PCR体系

表1 新冠检测试剂盒常规组分

何为RNasin？

RNase抑制剂（RNase inhibitor），也称RNasin。最早是存在于人胎盘中的一种特异性核糖核酸酶(RNase)抑制剂，分子量是50 kDa的蛋白质。其特异性失活RNase的原理是可与内源性或外源性RNase以非共价键结合形成复合体，造成RNase失活，从而保护RNA的完整度。可广泛抑制RNase A、RNase B和RNase C这三种酶的活性，保护RNA不被这三种酶降解。

RNase抑制剂的类别较多，但市面上的RNase抑制剂大多是重组的非人源蛋白，与其它竞争性抑制剂(核酸类、无机磷酸类)不同，RNasin可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去，而且纯度和产量更高，无人源DNA的污染，故用途更广。

图2：RNase 抑制剂分类

翊圣提供高品质RNasin

翊圣RNasin是以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂，在常见的核酸酶残留、切口酶和大肠杆菌残留等方面严格把控质检体系。RNasin能够广泛抑制各种类型RNase(RNase A、B和C)，经RT-PCR、RT-qPCR检验，可与常规逆转录酶及各种DNA Polymerase兼容。同时与人源RNase inhibitor相比，翊圣RNasin不含人源蛋白中的两个对氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性。同时，更加适合于对高DTT敏感性实验(如qPCR等)。

案例展示：

实验目的：翊圣RNasin的灵敏度和批次稳定性测试

实验方法：荧光PCR法检测丙型肝炎病毒HCV，RT-qPCR体系中验证三个批次的翊圣RNasin(40 U)灵敏度，阴性小牛血清稀释HCV标准品至E3,10IU/ml（x10）

结果分析：RNasin批次无明显差异，灵敏度均10/10检出；阴性无检出。