基因检测的应用变革了整个肿瘤的诊断和治疗格局，已经成为肿瘤诊疗中必不可少的关键步骤。相比组织

活检的局限性，循环肿瘤 DNA（ctDNA）创造了更多的非侵入式诊断、治疗和监测的可能性。

含义和特性

ctDNA 是从肿瘤细胞脱落的游离 DNA（cfDNA），由肿瘤细胞分泌或细胞死亡后释放入血。ctDNA 是小片段 DNA，通常少于 200 个核苷酸。循环中 ctDNA 存在时间很短，半衰期仅有 2 小时。

ctDNA 具有体细胞突变，借此和其他 cfDNA 得以区分。

ctDNA检测的优点

1、不需要侵入性步骤，避免了组织活检的风险和取样不足问题；

2、肿瘤具有时空异质性，组织活检只能给出某一时间点某一部分的「快照」；ctDNA 来自于所有部位的肿瘤，可能更准确地反映整个肿瘤全貌；

3、半衰期短，可以作为追踪几小时内治疗反应的动态工具。

ctDNA检测的缺点

1、肿瘤负荷较小时，不能敏感检测到微量的 DNA 变异；

2、不稳定，分析前有降解可能。

检测方法

由于 ctDNA 含量很少，所以需要高度敏感的检测手段。常用的检测技术包括测序和数字 PCR（dPCR）。

测序可以分析特定靶点乃至全外显子或基因组数据，可以同时检测多种突变。dPCR 检测含量可达到0.01%。虽然敏感性和特异性都高，但一次只有一种探针，检测效率受到突变数量影响。

ctDNA检测在临床中的应用

预后价值

ctDNA 可以预测预后和治疗反应。ctDNA 含量和分期及肿瘤大小相关，进展期肿瘤的 ctDNA 是早期肿瘤的 10～100 倍，而具有高肿瘤负荷的患者预后不良，因此 ctDNA 可以测量疾病负荷和预后。

一项结肠癌术后检测 ctDNA 的研究中，可检测到 ctDNA 的患者 2 年 RFS 率是 48%，而未检测到的患者是 100%。在预测复发上的敏感性和特异性是 100%。

分子分层，指导治疗

检测 ctDNA 中的 EGFR 突变已经用于非小细胞肺癌的临床。中国学者主持的 BENEFIT 研究是一项 ctDNA 为基础的 EGFR 分析指导 EGFR TKI 治疗的前瞻性研究。研究发现血检和组织学检测的一致性高，可以弥补组织学的不足。

而且在治疗有效时，ctDNA 水平下降，有助于早期判断疗效。虽然特异性高，但是 ctDNA 检测仅具有中度敏感性，含量太少时可能造成假阴性，这时候需要组织活检确认。

早期发现肿瘤耐药复发

很多研究表明肿瘤对治疗有反应时，ctDNA 水平降低，而疾病进展时又再度升高，因此可以提前于影像学发现肿瘤复发，有可能创造在临床进展前改变治疗方案的机会。但是还没有证据支持在 ctDNA 进展而无临床进展时改变治疗的策略可以改善结局。此外，一些研究表明 ctDNA 反应并不一定总和影像学反应平行。

肿瘤筛查

近期研究表明，联合蛋白质和 cfDNA 筛查肿瘤，筛查出 II 期肿瘤的敏感性为 73%，I 期肿瘤敏感性为 49%，而特异性＞90%。但是循环基因变异还可能来自于转化过程初期细胞，可能在临床上并没有重要意义。ctDNA 筛查的假阳性范围还难以界定，因此可能会带来过度诊断的问题。

ctDNA 检测方便而灵活，在肿瘤诊疗的众多领域中都具有巨大潜力。这个血液中的小小肿瘤指纹，有望开创新的分子病理学范例，通过精准肿瘤学而改变癌症治疗的未来。

菁良基因ctDNA标准品

产品特点

▪产品包含套装形式，可以测低至0.1%的LOD

▪验证常见的热门基因突变位点及突变形式

▪产品平均片段分布在160bp左右：最大程度接近真实血浆ctDN**段分布

▪细胞来源标准品，最大程度模拟患者样本

▪所有位点的AF皆通过ddPCR验证

产品应用