CGS Exo-spin™ 试剂盒是专用于提取细胞上清、尿液、唾液、血清、血浆等其他生物体液中外泌体的试剂盒， 通过沉淀法和SEC法（尺寸排阻色谱）即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，操作快速简便，收获外泌体产率高、纯度高。相较于传统的超速离心法，大量节省实验时间。
试剂盒选用——细胞上清
01 Exo-spin™ 外泌体纯化试剂盒如何保存？
产品常温运输。收到产品后，请于4℃保存，可以稳定保存一年。
02 Exo-spin™ 外泌体纯化试剂盒中使用哪种方法分离外泌体?
Exo-spin™ 试剂盒技术结合沉淀法和尺寸排阻色谱法(SEC)。
若样品不需要沉淀，也可单独使用SEC色谱柱。
03 什么是沉淀法?
沉淀法是利用沉淀反应物将组分从样品中以固体物质分离。Exo-spin™ 技术使用这种方法在SEC色谱柱分离前浓缩外泌体。
04 什么是尺寸排阻色谱(SEC)?
SEC尺寸排阻色谱法（Size Exclusion Chromatography）是一种根据粒径大小分离溶液中颗粒的方法，SEC柱采用树脂填充的多孔球形珠。当含有外泌体的溶液加入到SEC柱中时，较小的颗粒将会被捕获在孔中，而较大的分子则不会进入孔中先被洗脱。因此首先洗脱下来的是大分子，小分子或颗粒会滞留在孔中，需要长时间才能洗脱下来。
SEC尺寸排阻色谱法原理示意图
05 Exo-spin™ 色谱柱的树脂孔径是多少?
Exo-spin™ 色谱柱的树脂孔径约为30 nm。
06 Exo-spin™ 色谱柱是即用型吗?
CGS所有的Exo-spin™ 色谱柱都是预先平衡的，可即时使用。
07 Exo-spin™色谱柱如何操作?
10分钟学会使用SEC方法进行外泌体分离： 【外泌体研究】十分钟get外泌体提取方法！
08 Exo-spin™色谱柱可以重复使用吗?
我们不建议重复使用Exo-spin™色谱柱。
如需要重复使用，可重复使用3-5次，但随着使用次数增多会影响提取效率，液体流速可能会降低。
09 沉淀步骤的建议孵育时间多长?
对于所有类型的生物液体(血液除外)，1小时或过夜孵育。血液样本需要至少5分钟的孵育时间。
10 使用Exo-spin™柱后，看到柱已经改变了颜色。这是正常的吗?
是的，这是正常现象，色谱柱颜色的变化是由于蛋白质或小分子被滞留在色谱柱中。
11 最后的洗脱液不透明。这是正常的吗?
是的，最后的洗脱液不必是透明的。
12 如何在细胞培养基中浓缩外泌体?
2D培养的细胞上清平均每毫升含1x109个外泌体。当需要处理较大的样本量时，在柱纯化前使用沉淀剂浓缩外泌体。
13 提取的外泌体怎么保存？
短期保存（一周内）置于4℃即可，长期保存请放置于-80℃。
14 培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？
细胞培养时必须使用去除外泌体的血清（如去外泌体胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C3801-0050 ）或者无血清培养基，以降低背景值的干扰（牛血清中含有大量牛源外泌体）。
关于血清正确使用及饥饿培养对细胞的影响请查阅：
15 如何鉴定提取的外泌体？
根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。
更多外泌体相关问题，请查阅：【外泌体研究】常见问题大合集
