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ELISA试剂盒组份和操作步骤介绍

作者：北京雅安达生物技术有限公司 2015-05-05T00:00 (访问量:2185)

ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)；
(3)酶的底物；
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)；
(5)结合物及标本的稀释液；
(6)洗涤液
(7)酶反应终止液。

ELISA试剂盒操作步骤：
1. 加标准品：在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：除空白孔外每孔加入酶标试剂50μl。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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