THP-1细胞常用于多种科研实验，特别是与炎症和免疫方向相关的研究。这是因为THP-1细胞可分化为单核/巨噬细胞，这类细胞在固有免疫系统中扮演着重要角色，能够识别、吞噬和消化侵入机体的病原体或其他异物。同时，它们也是一类主要的抗原提呈细胞，对特异性免疫应答的诱导和调节起着关键作用。

                          启达生物THP-1(货号：CD0122)出库图

在特定的诱导条件下，例如使用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA），THP-1细胞可以被诱导分化成巨噬细胞。进一步地，通过添加不同的刺激因子，如脂多糖（LPS）和IFN-γ，可以将这些巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞；或者通过添加IL-4、IL-13等因子，诱导为M2型巨噬细胞。

M1型巨噬细胞在炎症反应中扮演重要角色，它们富含溶酶体颗粒，可以通过产生反应性中间物（ROI）、一氧化氮（NO）以及释放溶酶体酶来杀伤和清除病原体。此外，M1型巨噬细胞还能合成并分泌如MCP-1、CCL3、CXCL8等趋化因子，以及IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎因子，从而介导产生炎症反应。

相比之下，M2型巨噬细胞则主要合成和分泌IL-10、TGF-β等因子，这些因子具有抑炎作用，并参与损伤组织的修复和纤维化过程。

除了上述应用，THP-1细胞还可以用作体外癌细胞模型，研究单核细胞-巨噬细胞分化过程，以及检查与巨噬细胞相关的某些生理过程（如胆固醇外流）的模型。此外，通过特定的刺激因子，THP-1细胞还可以分化为未成熟或成熟的树突状细胞，为相关研究提供重要的细胞模型。

这么强大的THP-1细胞，就看你怎么用来发挥实验的最大效果啦！

准备材料：

 Transwell inserts 0.4 μM，THP细胞（启达生物，货号：CD0122)，1640含有10%FBS的正常培养基（启达生物 ，货号：MD0201）

，IL4、IL13、IFN-γ储备溶液、PMA（见实验步骤）LPS（见实验步骤） 

实验试剂制备：

IL4原液、IL13原液、IFN-γ储备溶液配制：在PBS含有0.05%BSA中制成100ug/ml，分装并于-80°保存；使用时：在无菌PBS中稀释至40µg/µl的浓度，然后等分并在-20°C下储存

脂多糖:在无菌PBS中稀释至40µg/µl的浓度，然后等分并在-20°C下储存

实验步骤：

Day 1:

1.THP-1细胞在RPMI/FCS培养基中悬浮生长，一旦接种到transwell插入物中就进行激活。使用手套在插入物的无菌边缘处理插入物。

2.使用血细胞仪对THP-1细胞进行计数，制成浓度为1×105个细胞/ml的细胞悬浮液。

3.然后通过每6个孔加入2ml RPMI/FCS培养基来制备一个6孔板。然后将transwell插入物放入含有2ml培养基的6孔中。

4.将2ml THP-1细胞悬浮液加入到插入物中（2x10^5个细胞/插入物）。

THP-1细胞一旦沉淀，立即用10 ng/ml 12-O-十四烷酰基horbol-l3-乙酸酯（PMA）处理24小时（1µl储备溶液，总体积为4 ml）。

Day2：

1.在PMA中活化的THP-1细胞24小时后在transwell插入物分化。

2.通过添加2ml新鲜RPMI/FCS培养基来制备新的6孔板。

3.然后从含有活化THP-1细胞的插入物中轻轻吸出含有PMA的培养基，并将插入物转移到新准备好的6个孔板上

4.然后将2ml RPMI/FCS培养基加入插入物中，并在处理前放置1小时。

5.然后用所需的细胞因子混合物处理插入物：

A.M1分化可以通过用15 ng/ml脂多糖（LPS）（1.5µl储备溶液转化为4ml）或50 ng/ml IFN-γ（2µl储备液转化为4ml）处理来实现。

B.M2分化可以通过用25 ng/ml IL4和25 ng/ml IL13（1µl储备溶液加入4 ml）联合处理来实现

鉴定看这里哦

THP-1诱导完成后可通过流式和免疫荧光、ELISA或特异性标记物（如IL1、IL10、精氨酸酶）的基因表达分析来评估向M1和M2型巨噬细胞的正确分化，并且从形态上也可以看出来，都是最基础的鉴定方法，这就不一一述来了。

                                        PMA刺激后的THP-1

                          THP-1细胞的诱导的M1形态（PMA)

                            Thp-1细胞诱导的M2形态（PMA)

THP-1诱导并不只是一条”路”，两种方法都可以通罗马

除了PMA方法外，还有ＧＭ⁃ＣＳＦ ／ Ｍ⁃ＣＳＦ都可以诱导出M1和M2细胞来，需要注意的是：ＧＭ⁃ ＣＳＦ ／ Ｍ⁃ＣＳＦ 诱导出的 Ｍ１ 和 Ｍ２ 型巨噬细胞均为悬 浮生长，ＤＣ 细胞处于半贴壁状态，有利于细胞的获 取再利用方面的研究，如流式细胞术检测；ＰＭＡ 所 诱导出的 Ｍ１、Ｍ２ 和 ＤＣ 细胞贴壁较牢固，消化困 难，但其形态上更接近原代细胞，有利于细胞形态学方面的研究，如间接免疫荧光染色、激光共聚焦等。

参加文献：

1. Vogelsang P, Karlsen M, Brun JG, et al. Altered phenolype andSlall expression in Toll-like receplor 7/8 slimulaled monoeyle-derived dendrilie cells from palients with primary Sjögren’ssyndrome[J]. Arthrilis Res Ther, 2014,16(4): R166.

2. Yang AX,Chong N, Jiang Y,el al. Molecular characterizationof antigen-peptide pulsed dendritie cells: immalure dendritie eellsdevelop a distinet molecular profile when pulsed with antigen peplide[J1.PloS 0ne,2014,9(1):e86306.

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