细胞株基本知识1：无菌操作基本技术

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminar flow）以紫外灯照射30-60分鐘灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开啟无菌操作台风扇运转10分鐘后，才开始实验操作。

2.每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共用培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。

3.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即应移出，以利於气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

4.小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。

5.实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作檯面。操作间隔应让无菌操作台运转5-10分鐘后，再进行下一个细胞株之操作。

6.工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对於来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台 （至少ClassII）。操作过程中，应避免引起aerosol之產生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。

7.CO2培养箱 ：

7.1. 细胞培养是否需二氧化碳供应，依细胞培养基种类而异。

7.2.若细胞培养基以碳酸盐為pH缓衝系统，则需补充二氧化碳以达到缓衝作用，应培养细胞於二氧化碳环境下，例如使用二氧化碳培养箱﹙常用之比例 為5%CO2，95% air﹚，或是灌入适量二氧化碳至培养容器内，放入一般培养箱中培养即可。為使二氧化碳能够流通，培养瓶(例如T-flask)放入二氧化碳培养箱时应鬆 开瓶盖，或使用透气瓶盖。取出观察时，则关紧瓶盖，以避免污染。

7.3. 若细胞培养基含有其他缓衝物质而不需二氧化碳供应，则放在一般培养箱中培养即可。

7.4. 培养箱内可放置水盘以维持适量之溼度，避免因培养基蒸发造成盐类浓度之变化而影响细胞生长。

8.定期检测下列项目：

8.1.无菌操作台：注意airflow压力，定期更换紫外线灯管、HEPA过滤膜及prefilter预滤网﹙300小时/预滤网，3000小时/HEPA﹚。

8.2. CO2培养箱：CO2浓度、温度、及水盘是否有污染。

8.3. CO2钢瓶：CO2压力

8.4. 恆温水槽：定期换水

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