基因治疗作为一种新兴疗法，是向靶细胞引入正常有功能的基因，以纠正或补偿致病基因所产生的缺陷，从而达到治疗疾病的目的。目前大多数基因治疗应用的仍是病毒载体，这些病毒载体经过改造后，已经不具有致病性。广泛应用的病毒载体包括腺病毒载体（ADV）、慢病毒载体（LV）、单纯疱疹病毒载体（HSV）、痘病毒载体（PV）及腺相关病毒载体（AAV）。作为递送基因疗法的有力工具，AAV是目前在研基因疗法项目中应用最为广泛的病毒载体。以AAV载体为代表的基因治疗药物能修正遗传病患者的基因缺陷，给一些遗传性罕见病、神经系统退化性疾病患者带来了希望。
AAV的衣壳蛋白以二十面体的构型聚集在一起，在结构上形成刺状突起，这些突起介导与靶向细胞表面蛋白质的相互作用，赋予了不同类型的AAV特异性地靶向不同组织地能力。AAV2是20世纪60年代从腺病毒中发现的首个AAV载体。迄今为止，已经发现了13种原发性AAV血清型和100多种不同的变异体。每种血清型都具有独特的细胞靶向性，可以靶向不同的细胞组织。
表1.不同AAV血清型以及它们相互作用的受体类型和组织趋向性
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AAV血清 |
原代受体 |
共受体 |
组织特异性 |
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AAV2 |
肝素 |
AAV受体、FGFR、LamR、整合素 |
中枢神经系统、视网膜、肝脏 |
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AAV5 |
唾液酸 |
AAV受体、PDGFR |
中枢神经系统、眼睛、肺 |
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AAV6 |
唾液酸、肝素 |
AAV受体、EGFR |
中枢神经系统、肌肉、肺、心脏 |
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AAV8 |
未知 |
AAV受体、LamR、 |
中枢神经系统、肝脏、心脏、眼睛 |
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AAV9 |
半乳糖 |
AAV受体、LamR、 |
中枢神经系统、肝脏、心脏、肌肉 |
根据AAV滴度测定不同原理，可以将其分为物理滴度测定和生物学滴度测定两大类，生物学滴度包括感染滴度和转导滴度。物理滴度，一般是指基因组滴度或者病毒颗粒滴度(衣壳滴度)。颗粒滴度主要是通过紫外吸光法、ELISA、HPLC等方法来测定，每种方法都有各自的优缺点，其中ELISA因其重现性高、特异性好等特点而得到了广泛的应用，这也是监管部门所建议的滴度测定方法之一。
产品应用
翌圣生物推出腺相关病毒定量检测试剂盒，可应用于基因治疗、细胞免疫治疗、干细胞治疗、生物大分子药物治疗等领域的研究，又可应用于基因工程研究等基础科研领域，还可以为基因治疗、细胞免疫治疗的CRO和CDMO企业进行产能赋能。
检测原理
以99302ES-AAV2 Titration ELISA Kit为例
99302ES是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定样本中的AAV2衣壳含量。特异性抗AAV2单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的AAV2衣壳与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中AAV2衣壳的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长测定吸光度值。
产品优势
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准确度高
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灵敏度好
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精密度高
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重复性好
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线性范围宽
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特异性高
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产品数据展示
标准曲线
质控数据
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Test Method |
Acceptance Criteria |
Test Result |
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Precision |
3.30E+09capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% |
5.6% |
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8.25E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% |
5.7% |
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2.06E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% |
5.0% |
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Accuracy |
Recovery：70%-130% |
80.9% |
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Specificity |
Different serotypes of AAV was added to the solvent, murine serum, rabbit serum, sheep serum, and E. coli cell supernatant. There are no cross-reaction between the kit and other serotypes of AAV. |
Conforms |
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Linearity |
R2≥99.0% |
99.7% |
产品推荐
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产品名称 |
规格 |
货号 |
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AAV2 Titration ELISA Kit |
96T |
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AAV5 Titration ELISA Kit |
96T |
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AAV6 Titration ELISA Kit |
96T |
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AAV8 Titration ELISA Kit |
96T |
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AAV9 Titration ELISA Kit |
96T |
99306ES |