新品上市 | 翌圣生物Protein A ELISA Kit

Protein A简介

Protein A （蛋白A）是从金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）中分离出来的一种细胞壁蛋白，天然Protein A包含3个不同的区域，即S序列、5个同源的IgG结合区域E、D、A、B、C以及一个细胞壁锚定区域XM。

来源：参考文献1

IgG结合区域能够独立结合IgG1、IgG2和IgG4的Fc部分，但与IgG3的相互作用较弱，每个Protein A能够与2个IgG结合。根据Protein A能够与IgG的Fc结合而不与Fab结合的特点，近几十年来，Protein A被广泛用于抗体蛋白纯化过程中。并且与其他层析方法如离子交换，疏水作用及体积排阻相比，亲和层析介质中的Protein A能够特异性与目标分子结合而不与其他杂质结合，从而能够提高目标蛋白收率。目前市面上以Protein A为配基而用于蛋白纯化的填料或纯化柱，大部分都在原天然Protein A的基础上对B结构域进行了改造，解决了Protein A耐碱性的问题，有利于对介质的原位清洗（CIP）。

在使用Protein A纯化填料进行抗体捕获的时候，可能会因为工艺，pH或添加剂不同，不可避免的发生Protein A脱落，并且培养上清中的蛋白酶会降解Protein A，破坏Protein A与介质骨架的偶联，所以在纯化工艺研究中，如何调整流速和保留时间，是确保纯化纯度、提高柱效、减少Protein A脱落、保证纯化柱寿命的关键。而Protein A也作为一种工艺杂质，受到各国监管机构以及生产企业的关注。

Protein A杂质的监管状态

残留在最终生物制品中的Protein A会严重影响产品质量、药效以及安全性，所以国内外法规对残留Protein A检测以及残留量标准均有相关文件出台。

《中华人民共和国药典》2020年版第三部《人用重组单克隆抗体制品总论》3.2.4 工艺相关杂质中提出“采用适宜的方法对供试品宿主蛋白质、宿主细胞和载体DNA、蛋白A及其他工艺相关杂质进行检测”。

《尼妥珠单抗注射液》3.1.3.3 蛋白质A残留量中提出“用酶联免疫吸附法（通则3429）测定，蛋白质A残留量应不高于蛋白质总量的0.001%”。

USP<130> PROTEIN A QUALITY ATTRIBUTES中提到希望厂家能够在纯化工艺中将脱落的protein A清除，生产工艺也需要进行相应验证。基于ELISA的残留检测基本上已被应用于工艺研发和验证过程中以确保在蛋白A亲和层析之后的过程步骤中能够有效去除残留蛋白A。此外，制造商应通过原材料鉴定和柱寿命研究，对树脂和配体质量有明确的了解和文件记录。

生物制品中的Protein A残留检测

翌圣生物经过匠心研发推出Protein A ELISA Kit，旨在为广大工业客户提供高质量、高灵敏度、批次稳定的优质产品，助力企业生物安全性评价。

Protein A ELISA Kit（Cat# 36716ES）是一款能够准确定量样品中残留Protein A的ELISA试剂盒，可用于抗体纯化过程中的工艺优化、关键质量参数评价以及中间产品和终产品中的Protein A残留量检测。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理进行Protein A残留量检测，将Protein A标准品和待测样品加入预包被抗Protein A抗体的Protein A捕获微孔板条（36716-A），然后加入稀释后的生物素标记的Protein A检测抗体（36716-C），最后加入Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36716-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入TMB显色液（36716-F）显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液（36716-G）的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的Protein A的量呈正相关。

产品性能

符合法规：试剂盒按照法规要求进行全面验证，可提供验证报告；

保障品质：批次稳定，批间差异小；

灵敏度高：检测限达到3.1 pg/mL，定量限为15.6 pg/mL；

精密度高：批内差小于10%，批间差小于15%；

专属性强：试剂盒抗体不与IgG反应；

适用性广：可用于检测天然、重组以及MabSelect SuReTM的Protein A。

产品信息

产品名称	货号	规格
Protein A ELISA Kit Protein A残留量ELISA检测试剂盒	36716ES	1 KIT

参考文献

[1] Protein A chromatography for antibody purification [J].Journal of Chromatography B,(2007) 848 (2007) 40–47.

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