为了研究人类IFN在小鼠中的作用，设计了一个由人类IFNAR2和IFNAR1组成的串联表达盒，它们由一个2A序列连接，并将其置于小鼠IFNAR2启动子的控制下表达。这两种小鼠IFNAR1和IFNAR2基因的距离分别位于16号染色体上（仅130kb），避免了连续两轮的基因操作，节省了时间。对于小鼠Ifnar2基因，在ATG起始密码子旁边的第2外显子中插入一个外源序列，不仅使启动子活性不受干扰，而且在第1外显子和第2外显子之间保留了一个完整的内含子，增加了新mRNA的稳定性。在3‘端有一个polyA信号序列，提供了一个转录停止信号，并导致小鼠IFNAR2的表达中止。这个设计保持了插入的人IFNAR1和IFNAR2基因的表达，同时导致小鼠IFNAR缺陷

在嵌合的huIFNAR中，既可以对人的IFNα刺激作出反应，又可以保证结合蛋白的募集和下游通路的激活。通过逆转录PCR证实了huIFNAR mRNA的表达。流式检测细胞表面huIFNAR2蛋白的正常表达。最后，在体内和体外测试huIFNAR小鼠是否对人I型干扰素注射有反应。人IFNα2处理导致小鼠Mx1（mMx1）和小鼠Isg15（mIsg15）mRNA水平上调。然而，当huIFNAR被抗hR1和/或抗hR2抗体阻断时，这种激活作用减弱，这意味着huIFNα2诱导的mMx1和mIsg15表达的增加是由人源化的I型IFN受体介导的。为检测huIFNAR小鼠在体内的反应，腹腔注射人PEG-IFNα2。在huIFNAR小鼠的PBMCs、肝脏和脾脏中观察到mMx1和mIsg15 mRNA水平显著升高，进一步证实了huIFNAR小鼠已成功构建，并对人干扰素刺激有反应。通过WB检测脾脏组织中mISG15的表达。与小鼠IFNα5相比，人PEG-IFNα2诱导的mISG15蛋白水平显著升高。综上，作者成功地生成了功能性I型干扰素受体人源化小鼠。

2. Peg-IFNα2刺激huIFNAR小鼠PBMCs中的免疫反应与人类PBMCs中类似

使用mRNA测序比较了小鼠PBMCs和人类PBMCs中受刺激的基因表达谱。与模拟处理相比，487个ISG中有199个有显著变化。利用每个huIFNAR PBMCs和人类PBMCs的前5000个DEGs进行KEGG富集分析。PEG-IFNα刺激了huIFNAR PBMCs中109条KEGG通路富集和人PBMCs中146 最显著富集的BP非常相似。与免疫系统过程和代谢相关的变化进一步证实了这种相似性。人Peg-IFNα2诱导的huIFNAR小鼠与人PBMCs的基因反应高度相似，表明huIFNAR小鼠可以作为探索人I型干扰素在体内功能的替代模型。

3. 人类IFNα2的组织特异性应答图谱

选择了9个主要组织（脑、血、肺、心、肝、脾、肾、肌肉和肠）来消除体内对人PEGIFNα2刺激的组织特异性反应。在不同的组织间观察到huIFNAR mRNA水平的不同。血液、肝脏和脾脏的huIFNAR表达水平最高，肌肉、肠道和大脑的表达水平最低。因此，不同组织对IFNα2的反应有很大差别。血液、肝脏和脾脏在PEGIFNα2刺激下表现出最明显的图谱变化。心脏、大脑和肠道的反应较微弱。分级聚类显示，与血液相比，肝脏中的一个小基因簇显著上调。与肝脏相比，血液中的另一个基因簇下调。对前50个ISG的变化进行了分析，发现组织之间在数量和大小上存在显著差异，突出表明每个组织对干扰素都有独特的敏感性。在体内全面的组织特异性基因表达图谱揭示了对人类IFNα2刺激反应的功能差异性。

4. 人Peg-IFNα2治疗降低了HuIFNAR小鼠中的HBsAg水平

选择了一个包含1.3倍HBV基因组（AAV-1.3XHBV）的腺相关病毒载体，以保证HBV在小鼠中长期存在。在PEG-IFNα2治疗前6周，通过尾静脉注射AAV-1.3×HBV。野生型C57BL/6J作为PEG-IFNα2治疗对照。每周检测病毒HBsAg、HBeAg和HBV DNA。与野生型小鼠相比，HBV生物标志物如HBsAg和HBeAg在早期时间点存在差异。与预期的一样，PEG-IFNα2在C57BL/6J小鼠中未能抑制HBV。相比之下，IFNα治疗组的HBsAg从第7周开始开始下降。从第10周到终止治疗，当每周使用两次PEG-IFNα2时，并没有观察到进一步的下降。在终止时，PEG-IFNα2中的平均血清HBsAg水平约为模拟小鼠的8.04倍。同样，HBeAg从第9周开始下降，但在终止时仅下降了2.15倍。一只经PEG-IFNα2处理的huIFNAR小鼠获得了HBsAg和HBeAg的丢失，而另一只经处理的huIFNAR小鼠在接受PEG-IFNα2治疗后，HBsAg显著减少。在PEG-IFNα2组的6只小鼠中有2只中检测到HBsAb。PEG-IFNα2降低肝内病毒pgRNA和总mRNA，在#3小鼠中几乎完全抑制。肝内病毒rcDNA结果显示，huIFNAR模型中的HBV rcDNA水平比野生型C57BL/6J AAV-HBV模型低一半。

5. PEG-IFNα2治疗15周后肝内免疫细胞群的改变

对8856个细胞的基因表达数据进行聚类分析，揭示了8个主要不同的细胞类型。PEG-IFNα2治疗显示出增加髓系和中性粒细胞数量的趋势，并减少NK/T和B细胞数量。与模拟小鼠相比，在peg-IFNα2处理的小鼠的单核细胞中，有67个基因表达上调，16个基因表达下调。这些差异表达的基因富集于NF-kappaB信号通路、toll样受体信号通路、细胞凋亡和IL-17信号通路。单核细胞似乎具有促炎的特性。与模拟治疗相比，IFNα2使单核细胞敏感，使其对IFN更敏感，增强抗原呈递，提高共刺激分子表达，对免疫细胞更有吸引力，以及增殖活性。utg1a高的簇更容易对IFN产生反应，而MHCI高的簇显示出更高的抗原呈递评分。trem1高的簇似乎对IFN的反应较弱，趋化因子促炎症和增殖的得分较高。流式分析显示，经PEG-IFNα2治疗后，肝脏中MHCII+ Ly6C+单核细胞和促炎巨噬细胞显著增加。

与模拟小鼠相比，NK和NKT细胞在PEG-IFNα2处理的小鼠中的数量略有减少，但肝脏常驻NK细胞的数量显著减少。T细胞在肝脏中富集，但CD4水平不受影响。PEGIFNα2处理组的CD8+ T细胞显示出白细胞粘附、激活和T细胞受体信号传导等功能上调。整个CD8+细胞在活化、趋化因子、细胞毒性和衰竭方面的得分较高。Lef1+CD8t细胞数量明显减少，而TeffCD8t细胞数量明显激。肝内Teff CD8 T细胞表现出活化功能、细胞毒性功能和趋化性功能的增强。Teff CD8 T细胞也失调了耗尽特异性基因的表达，并表现出耗尽的基因表达谱，表明这些细胞群的效应功能包括衰竭分子的上调。流式分析还显示，效应记忆CD8+ T（TEM）细胞显著增加，CD8+ TEM和总CD8 T细胞均表达PD-1水平升高。使用酶联免疫吸附点（ELISpot）试验分析了HBV特异性T细胞的免疫反应。用HBV和HBsAg刺激肝内淋巴细胞。测定分泌的小鼠IFN-γ。但没有观察到HBV特异性T细胞。总之，在效应CD8T细胞中，衰竭生物标志物的共同表达可能会降低这些细胞在体内抑制HBV的效力。